伯乐配资 实验室干货！SYTOX Orange Nucleic Acid Stain的使用方法_细胞_iFluor_荧光

结构基础：SYTOX Orange Nucleic Acid Stain是一种高亲和力核酸嵌入染料。

化学结构设计使其仅能穿透膜受损的死细胞，无法进入活细胞。

其作用机制基于与DNA/RNA的强结合力，结合后荧光强度增强>500倍。

结合模式：通过单嵌入（mono-intercalation） 与双链DNA结合，每个染料分子使DNA轮廓长度增加一个碱基对，且结合力随张力升高而增强。

存在两种模式：低浓度时以嵌入为主，高浓度时转为次要凹槽结合。

英文名称：SYTOX Orange Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO) 死细胞橙色荧光核酸染料

中文名称：SYTOX Orange死细胞橙色荧光核酸染料

激发波长（Abs） ：547 nm

发射波长（Em） ：570 nm

荧光量子产率：0.9

状态：常温下为红色溶液

纯度：≥95%

生产厂商：西安强化生物科技

（1）储存液准备

储存条件：-20℃避光干燥保存，有效期≥1年。运输需冰袋。

解冻操作：使用前室温平衡温度，短暂离心使DMSO溶液沉至管底。

避光要求：全程避光操作，减缓荧光淬灭。

（2）工作液配置

稀释缓冲液：生理缓冲液（如PBS）。

浓度指南：

细胞类型：细菌

工作浓度：0.01–0.1 µM

孵育条件：涡旋混匀，≥5 min

细胞类型：酵母

工作浓度：0.05–0.5 µM

孵育条件：≥10 min，周期性摇晃

细胞类型：哺乳动物/真核细胞

工作浓度：0.1–5 µM

孵育条件：≥10 min

（3）配置示例：

储存液浓度：5 mM (5000 µM)

取1 µL储存液 + 999 µL缓冲液 → 5 µM中间液

再取200 µL中间液 + 800 µL细胞悬液 → 终浓度1 µM

（4）染色步骤

样本准备：

细胞悬液调整至 1×10⁵–5×10⁷ cells/mL。

去除培养基残留，用缓冲液（如PBS）重悬。

加染料孵育：

直接加入SYTOX Orange工作液至细胞悬液，轻柔混匀。

孵育条件：室温或2–6℃避光，时间≥10 min（真核细胞）或≥5 min（细菌）。

流式标准流程：孵育≥20 min。

终止与检测：

无需洗涤：染料结合稳定，洗涤可能导致假阴性。

立即检测：避免长时间放置导致荧光衰减。

iFluor 350 amine

iFluor 350 hydrazide

iFluor 555叠氮化物

iFluor 594马来酰亚胺

iFluor 570 succinimidyl ester

iFluor 488 alkyne iFluor 488 炔烃

iFluor 488 Tetrazine iFluor 488 四嗪

ReadiUse 预活化 PE-Cy5 马来酰亚胺

ReadiUse 预活化 APC-AF700 马来酰亚胺

ATTO 488 acid ATTO 488酸 1443553-08-9

NBD-Cl [4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑

EDANS钠盐 [5-(2-氨基乙氨基)-1-萘磺酸钠盐

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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！

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